INTRODUCCIÓN
Una preparación histológica es el corte fino de un tejido con
el fin de ser observado al microscopio. Según las necesidades de estudios, las
preparaciones pueden ser temporales o permanentes. Las primeras son frescas
para la observación de células vivas, utilizando colorantes vitales (aquellos
que causan poca alteración físico-química en el protoplasma de la célula) o en
su caso células muertas utilizando colorantes supra vitales, este tipo de preparaciones
se desecha el mismo día.
Las preparaciones permanentes son conservadas por largo tiempo,
se obtienen de complejo procesos y su montaje se realiza con bálsamo de Canadá
o resinas sintéticas. Cualquiera que sea la elección del observador por uno u
otro tipo de preparación, debe tomar en cuenta que los métodos a emplear están en
función de:
- El carácter del material
- El uso que se le dará a la preparación
- Disponibilidad de equipo, sustancias químicas y tiempo.
Las preparaciones temporales son las más sencillas de elaborar, estas se pueden
realizar con material fresco de fácil manejo, por medio de cortes directos de
tipo transversal, radial, tangencial o por medio de frotis o aplastado. Los
pasos a seguir para su elaboración son los siguientes:
- Corte: se hacen cortes finos, según la estructura deseada a observar, se colocan en cajas de Petri que contengan agua corriente, de donde se seleccionan los cortes más finos y se colocan en un portaobjetos; o también pueden hacerse un raspado ligero de una estructura carnosa.
- Tinción: se agregan de una a tres gotas de colorante, a fin de que la estructura quede cubierta, se deja reposar de dos a tres minutos.
- Enjuague: se coloca el cubreobjetos, se enjuaga el exceso del colorante con agua corriente en caso de cortes, no así para el raspado o frotis.
- Observación: se seca con un lienzo o papel tanto la inferior del portaobjetos como los extremos no cubiertos por el portaobjetos, y se coloca en el microscopio para su observación.
Para elaborar las preparaciones permanentes se sigue un largo
proceso de laboratorio que incluye las siguientes etapas:
- Fijación: se selecciona el material biológico, realizando el corte de una porción representativa de menos de 1 cm y se incluye en F.A.A ( solución de ácido acético, alcohol del 96% y agua destilada, proporción 1:1:1 )
- Deshidratación: la porción de la planta se pasa por alcoholes de menor a mayor concentración, hasta llegar a alcohol absoluto. (alcohol al 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 96%, y absoluto).
- Inclusión: deshidratado el material biológico se incluye en cera especial para histología.
- Corte: los cortes se realizan con micrótomo, logrando un grosor de entre cinco y nueve micras.
- Tinción: para llevar a cabo la tinción se elimina la cera del tejido y se fija este a base de calor, posteriormente se tiñe con diversos colorantes en ocasiones la tinción puede durar de una a veinticuatro horas, según sea el colorante utilizado.
- Contra tinción: en algunas técnicas de tinción se utiliza más de un colorante, y dependiendo de si este es a base de agua o de alcohol, se hidrata o se deshidrata el tejido, pasándolo por los alcoholes a las deferentes concentraciones como los ya mencionados.
- Clarificación: los reactivos clarificantes tienen la misión de limpiar el material, eliminando algunos contenidos celulares. El reactivo clarificante por excelencia es el hipoclorito sódico. Se emplea concentrado o diluido en agua según sea el grosor del corte y la consistencia del material.
- Impregnación-montaje: una vez terminado el proceso, se agrega sobre el tejido una gota de bálsamo de Canadá, que es una resina natural sobre la que se coloca el cubreobjetos, haciendo una ligera presión para que quede sellado, teniendo cuidado de que no quede espacios con aire: los excesos de la resina se eliminan con xilol, se limpian la preparación y se da por terminado el montaje.
Esta es la forma de obtener laminillas que pueden conservarse
por años, de tejidos tanto duros como suaves o blandos, pero que tienen un
proceso de tejidos muertos después de la fijación. Este último tipo de preparación no las
elaborara pero las usara continuamente, por lo que le recomendamos su uso y
cuidado adecuados debido a su excesivo costo.
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